足交 twitter 负载淫羊藿苷的壳聚糖基仿生支架的促软骨酿成和炎症缓解作用
发布日期：2024-10-06 21:06 点击次数：74
软骨组织工程(cartilage tissue engineering， CTE) 为重要软骨挫伤的再素性配置提供无穷远景[1]。然则足交 twitter，CTE的再生功效在很猛进度上与植入的生物材料支架的促软骨酿成才调[2]以及因支架植入带来的移植位点炎症反应的进度相关[3-4]。因此，感性构建具有合适的物理和化学信号的仿生CTE支架以促进软骨酿成和减轻软骨再生中的炎症反应至关清苦。
壳聚糖(chitosan， CS) 是一类自然多糖团员物，其化学结构与自然软骨细胞外基质(extracellular matrix， ECM) 中的糖胺聚糖(glycosaminoglycan， GAG) 结构相同[5-7]，因而常被用来制备具有高含水率和雷同软骨三维汇蚁合构的水凝胶支架用于软骨组织工程。连年来，一些议论将可降解的电纺纤维制成短纤维复合到水凝胶中[8-9]，这在增强壳聚糖水凝胶基膂力学性能的同期还进一步普及了对自然软骨微结构的仿生进度[10-11]，推崇出风雅无比的临床应用改造后劲[9]。为进一步普及壳聚糖基CTE支架的生物功能性，除了在CTE支架上负载具有生物活性的表皮孕育因子(epidermal growth factor， EGF)[12]、卵白类改造孕育因子(transforming growth factor-β1， TGF-β1)[13]或者抗炎因子(interleukin 4， IL-4)[14]等活性因素除外，寻找一种合适的兼具促软骨酿成和抗炎作用的非卵白孕育因子替代物(如小分子药物)，将不仅成心于更正CTE支架的生物功能性，况兼克服了传统卵白孕育因子存在的资本高、不踏实以及引起无须要的免疫反应等问题[15-16]。
淫羊藿苷(icariin， ICA) 是从植物干燥的茎叶中索求的自然小分子药物，具有促进软骨酿成、抗炎及抗肿瘤等多种功效[17]。有议论标明，将ICA平直加入培养基中培养软骨细胞，大概促进软骨细胞的增殖和软骨生成相关基因(如gag、col II和sox-9等) 的抒发，减少细胞外基质的降解[18-19]。另外，也有议论默契向含有肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α， TNF-α) 的培养基中加入ICA后，大概通过下调软骨细胞中的NF-κB/HIF-2α信号通路扼制TNF-α刺激引起的炎症反应[20]。因此，将ICA当作卵白因子替代物与纤维增强的壳聚糖水凝胶仿生支架推敲，构建具有炎症缓解特点的工程软骨仿生支架，不仅大概兑现药物局部寄递到软骨缺损部位，还可能赋予支架促进软骨酿成和煦解炎症的双重作用，将是一种有后劲的更正壳聚糖基CTE支架生物功能性的计策。
本议论的主要主义是将ICA负载到短纤维增强的壳聚糖基水凝胶中以增强该仿生CTE支架的促软骨酿成和煦解炎症的才调。如图 1所示，领先通过冻-融和冷冻干燥要领制备PDA@PLCL短纤维增强的壳聚糖基支架(PDA@PLCL/CC)，然后将ICA通过物理吸附要领负载到PDA@ PLCL/CC上，制备成载药的ICA-PDA@PLCL/ CC仿生软骨支架。临了，通过体外兔软骨细胞培养履行，考证ICA当作一种多功能生物活性因素在促进软骨酿成和消弱软骨细胞的炎症反应中的作勤快效。
1 材料与要领 1.1 履行材料、试剂和仪器材料及试剂：聚l-丙交酯-己内酯(PLCL，粘度3.6 dL/g，共聚比75:25，济南岱罡生物材料)；聚氧化乙烯(PEO， MW > 500万，Alfa Aesar公司)；六氟异丙醇(HFIP， 上海达瑞)；壳聚糖(CS， 脱乙酰度为86.32%，MW=90万，浙江金壳生厌世学有限公司)；柠檬酸(CA， 国药集团化学试剂有限公司)；淫羊藿苷(ICA， 成王人格利普生物科技有限公司)；多巴胺盐酸盐(DA， 好意思国Sigma)；高糖DMEM培养基(HyClone公司)；胎牛血清(FBS， Gibco公司)；青霉素-链霉素(P/S， Gibco公司)；CCK-8试剂(上海碧云天生物有限公司)；4’， 6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI染料， Invitrogen公司)、鬼笔环肽染料(Phalloidin， Invitrogen公司)；活/死细胞染色试剂盒(赛默飞世尔科技公司)；BIOZOL全RNA索求试剂盒(新赛好意思生物科技有限公司)；回转录和定量试剂盒(天根生化科技)；糖胺聚糖(GAG)、Ⅱ型胶原(Col Ⅱ) ELISA试剂盒(上海Korain Biotech公司)；白介素-1β (IL-1β， PeproTech公司)；甲苯胺蓝染液(武汉赛维尔生物科技有限公司)；兔软骨细胞(上海市第九东说念主民病院)。
仪器：磁力搅动器(H05-1， 上海梅颖浦仪器科技有限公司)、PB100型手捏式匀浆机(PB100， 英国Prima公司)、冷冻干燥机(Lab-1C-80， 北京博医康履行仪器有限公司)、扫描电子显微镜(JSM-5600， JEOL公司)、力学测试机(HY-940FS， 上海恒驭仪器有限公司)、紫外分光光度计(TU-1810， 北京普析通用仪器有限职守公司)、酶标仪(MK3型， Thermo公司)、极端荧显豁微镜(Eclipse Ti-S， 日本Nikon公司)、金相显微镜(Nikon 80i， 尼康公司)、PCR仪(9700型， Life公司)、及时荧光定量PCR仪(ABI Prism 7500， Applied Biosystems公司)。
1.2 PDA@PLCL纤维增强CS基复合水凝胶的制备与表征将PLCL熔化于六氟异丙醇(hexafluoroisopropand， HFIP) 溶剂中，按PLCL和PEO质料比为19:1配制成质料体积比为12%的纺丝液进行电纺丝，取得PLCL取向电纺纤维膜。将多巴胺盐酸盐溶于10 mmol/L的Tris-缓冲液(pH 8.5) 中，配制成2 mg/mL的DA溶液。将纤维膜剪成顺应大小浸泡在DA溶液中，室温飞动12 h，取得PDA涂覆的PLCL纤维膜(PDA@PLCL)。将PDA@PLCL纤维膜剪成2 mm×2 mm大小的碎屑后在去离子水中通过匀浆机作念匀浆不断，冻干后取得PDA@PLCL短纤维。然后将一定量的短纤维(wt=50% CS) 加入到柠檬酸交联的壳聚糖溶液(WCS: WCA=7:3)中，搅动均匀后倒入48孔板冷冻干燥3 d，之后用0.5 mol/L NaOH溶液解冻4 h，取得PDA@PLCL/CC水凝胶(图 1)，去离子水浸泡3 d后冻干。
通过扫描电子显微镜(SEM) 对CC、PLCL/CC和PDA@PLCL/CC支架的里面微不雅结构进行刻画不雅察。专揽Image-J软件分析孔径大小。通过无水酒精置换法检测支架孔隙率[21]。通过测量支架在PBS (37 ℃) 中浸泡不同本事的分量变化分析其吸水率。为详情各支架的压缩力学性能，将干态的CC、PLCL/CC及PDA@PLCL/CC支架(直径11 mm×高5.5 mm) 以3 mm/min的速率在力学测试机上垂直压缩60%应变，通过应力-应变弧线蓄意干态下各组支架的杨氏模量。
1.3 负载ICA的PDA@PLCL/CC水凝胶的药物开释行为将ICA溶于二甲基亚砜，配制成浓度为10 mmol/L的ICA母液，然后用酒精稀释成3种不同浓度的ICA药物溶液(10、50、100 μmol/L诀别定名为ic1、ic2、ic3)。将PDA@PLCL/CC支架浸泡在3种不同浓度的ICA溶液中，37 ℃恒温水浴中100 r/min飞动12 h进行药物吸附，取得ic1-PDA@PLCL/CC、ic2-PDA@PLCL/CC、ic3-PDA@PLCL/CC载药支架。然后取出支架，保留载药支架负载后溶液，用紫外分光光度计检测360 nm处吸光值[22]，字据模范弧线蓄意溶液中药物的剩余量，专揽公式(1) 蓄意支架对ICA的负载效用：
(1)
其中，W0和W1诀别是溶液中ICA加入的总量和负载后溶液中ICA的余量。
为检测载药支架在PBS中的开释情况，将载药支架浸泡在5 mL的PBS溶液中，37 ℃、90 r/min摇动。在不同本事点，取出3 mL的药物开释液，再加入等量的崭新PBS。用紫外分光光度计测量所汇集的PBS在360 nm处的吸光值，字据模范弧线蓄意ICA的开释量并绘图开释能源学弧线。
1.4 细胞种板和支架浸提液的索求将冻存的兔软骨细胞(P2) 在含10% FBS和1% P/S的高糖DMEM培养基中进行复苏后培养。细胞种板前，将各组支架材料在紫外下映照24 h，75%的酒精浸泡2 h，PBS清洗后加入培养基在37 ℃预培养过夜。临了，按照一定细胞密度接种到支架上，2 d更换一次培养基。
将各组支架诀别浸泡在无血清的培养基中，37 ℃飞动24 h后，汇集支架浸提液，用0.22 μm无菌过滤器进行无菌过滤足交 twitter，然后加入10%的FBS和1%的P/S配制成浸提液条目培养基[23]。
1.5 细胞毒性评价通过CCK-8检测负载不同ICA浓度(ic1、ic2、ic3)的支架对细胞增殖的影响。将密度为5×105个/孔的软骨细胞接种在PDA@PLCL/ CC、ic1-PDA@PLCL/CC、ic2-PDA@PLCL/CC和ic3-PDA@PLCL/CC四组支架上，加入500 μL培养基，专揽CCK-8试剂盒检测培养1、4、7 d后的细胞增殖情况。
通度日/死细胞染色检测支架的细胞活力。将密度为5×105个/孔的软骨细胞接种在CC、PLCL/CC、PDA@PLCL/CC和ic1-PDA@PLCL/ CC (即ICA-PDA@PLCL/CC) 四组支架上，加入500 μL培养基，培养48 h后每孔加入300 μL活/死染色试剂孵育15 min，孵育完成后用PBS清洗，临了在极端荧显豁微镜下不雅察细胞的存活情况。
1.6 软骨细胞刻画不雅察将密度为5×105个/孔的软骨细胞接种在CC、PLCL/CC、PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@ PLCL/ CC四组支架上，每孔加500 μL培养基，放入细胞培养箱中培养4 d后，用2.5%的戊二醛固定细胞4 h以上，然后进行酒精梯度脱水，脱水驱散后冻干，通过SEM不雅察支架上细胞的刻画并拍照。
将密度为5×105个/孔的软骨细胞接种在24孔细胞培养板中，先通过含IL-1β (1 μg/mL)培养基指点培养软骨细胞24 h，随后加入500 μL的PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC支架浸提液条目培养基，培养24 h后用Phalloidin和DAPI诀别对细胞骨架和细胞核进行染色，不雅察支架开释的ICA对炎症软骨细胞刻画变化的影响。
1.7 基因抒发将软骨细胞以5×105个/孔的细胞密度接种到6孔细胞培养板，随后加入2 mL的CC、PLCL/ CC、PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC四组支架浸提液条目培养基培养4 d后，按照BIOZOL试剂盒阐明索求RNA，然后按照FastKing cDNA第一链合成试剂盒的要领，将索求到的RNA回转录成cDNA，临了按照Super Real PreMix Plus (SYBR Green) 试剂盒，加样驱散后进行qRT-PCR履行，检测软骨相关基因sox-9、gag、col Ⅰ和col Ⅱ的抒发。
另外，将软骨细胞以5×105个/孔的细胞密度接种到6孔细胞培养板，用含IL-1β培养基指点培养24 h，随后加入2 mL的PDA@PLCL/ CC和ICA-PDA@PLCL/CC支架的浸提液条目培养基培养24 h后，检测炎症软骨细胞促炎症基因(il-1β、il-6、inos)、金属基质降解酶(mmp-3) 及软骨相关功能基因(sox-9、gag、col Ⅱ)。管家基因GAPDH配置为内参，软骨细胞功能抒发基因及炎症相关基因引物序列见表 1。
1.8 卵白含量测定(ELISA)将软骨细胞以5×105个/孔的细胞密度接种到CC、PLCL/CC、PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@ PLCL/CC四组支架上，每孔加入500 μL培养基，培养4 d后，取上清液。按照阐明书配制不同浓度的模范品，加入模范品样品，随后加入抗GAG或Col Ⅱ抗体，再加入酶链亲和素-HRP，盖上封板膜，37 ℃孵育60 min后进行洗涤。然后向每孔循序加入显色剂A、显色剂B，飞动混匀，37 ℃避显豁色10 min。临了加入阻隔液阻隔反应。用酶标仪在450 nm处测量吸光值，通过模范样品的浓度和对应吸光值作模范弧线，并蓄意GAG和ColⅡ含量。
1.9 甲苯胺蓝染色为议论炎症作用下ICA-PDA@PLCL/CC对炎症软骨细胞分泌GAG的影响，将软骨细胞以2×105个/孔的细胞密度接种到24孔细胞培养板，用含IL-1β培养基指点培养24 h，再加入500 μL的PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC支架的浸提液条目培养基培养4、7 d后，使用甲苯胺蓝染料进行染色。要领为：吸出培养液，每孔加入500 μL甲苯胺蓝染料，静置10 min。然后吸去染料，PBS洗3次后，用金相显微镜对4 d、7 d的GAG分泌情况进行不雅察和拍摄。
1.10 免疫荧光染色为议论ICA-PDA@PLCL/CC支架开释的ICA对炎症软骨细胞分泌ColⅡ的影响，将软骨细胞以5×105个/孔的细胞密度接种到24孔细胞培养板，用含IL-1β培养基指点培养24 h，然后加入500 μL的PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC支架的浸提液条目培养基培养24 h后，通过免疫荧光染色检测软骨细胞Col Ⅱ的抒发情况。要领为：用4%的多聚甲醛固定30 min，PBS冲洗后加入0.1%的Triton X-100通透15 min；然后用10%的山羊血清禁闭30 min，用PBS将一抗稀释200倍，每孔加300 μL，4 ℃孵育过夜；PBS清洗后加入300 μL荧光物资标记的二抗，避光孵育90 min，PBS洗涤后用DAPI染料对细胞核染色，临了用极端荧显豁微镜进行不雅察和拍照。
1.11 统计分析通盘履行数据以平均值±模范差形貌默示，禁受Origin 8.0软件对相关数据进行统计分析(单因素方差分析one way ANOVA)，分析履行各组之间是否存在权贵性各别。*：P < 0.05时为有权贵性各别；**：P < 0.01时为有极权贵性各别。
2 为止与分析 2.1 PDA@PLCL/CC水凝胶的制备过甚对ICA的负载和开释通过SEM不雅察支架的截面刻画，从图 2A不错看出，3组支架均具有连通的多孔结构。对孔径大小进行统计分析(图 2B) 发现，CC、PLCL/CC和PDA@PLCL/CC支架的孔径诀别是(121±39) μm、(129±29) μm和(119±25) μm，组间无权贵性各别。孔隙率检测为止(图 2C)显现，比拟CC的孔隙率(86.7±2.2)%，PLCL/CC和PDA@PLCL/CC的孔隙率略有缩短，诀别是(84.3±2.0)%和(84.2±2.3)%，但无权贵性各别，这可能与短纤维的引入相关。3组支架均具有较合适的孔径(100−300 μm) 和孔隙率(> 80%)，显示细胞孕育的空间要求[24-26]。
CC、PLCL/CC和PDA@PLCL/CC三组支架均具有快速吸水才调(图 2D)，在1 min内基本均达到最大吸水率，之后处于踏实景色。相关于CC组，PLCL/CC组的吸水率昭着下落，而PDA@PLCL/CC组的吸水率要高于PLCL/CC组，这可能与PDA含有的大王人亲水基团(−NH2和−OH) 相关。高吸水率成心于为细胞的孕育提供合适的养分和代谢家具的交换才调。
引入短纤维不错权贵增强CC支架的力学性能(图 2E–F)。与CC组比拟，PLCL/CC组和PDA@PLCL/CC组的压缩应力诀别普及了0.7倍和2.3倍，杨氏模量则诀别普及了1.3倍和2.6倍。就增强效用来看，PDA@PLCL短纤维的增强效用最昭着，这可能是PDA@PLCL与水凝胶CC基质之间的界面相互作用更强所致。支架较高的力学性能成心于为软骨组织再生提供合适的结构支捏。
在对ICA的负载方面，从图 2G不错看出，支架对ic1、ic2和ic3浓度下的负载率诀别达到了(48.5±1.7)%、(52.7±0.5)%和(43.7±0.3)%。从开释能源学(图 2H) 为止看，负载3种不同浓度ICA药物的支架，在前18 h均有突释征象，之后呈现逐渐开释景色。在18 h时，ic1、ic2和ic3浓度下支架的ICA开释率诀别为69.3%、17.7%和12.4%。这可能由于ICA难溶于水，在PBS中熔化度有限，导致ic1浓度下支架的开释率高于其他两组。
2.2 ICA-PDA@PLCL/CC仿生支架对软骨细胞功能的影响当作一种促软骨再生和抗炎的小分子药物，有议论标明ICA的安全浓度阈值很低，浓度进步10 μmol/L时可不雅察到细胞毒性[18， 27-28]。从细胞增殖为止(图 3A) 看，负载3种浓度的支架均能促进细胞增殖，但在第7天时，ic1-PDA@PLCL/CC对软骨细胞的增殖才调权贵高于其他组，显现出更好的促软骨细胞增殖才调。因此，后续履行使用ic1浓度的药物负载支架进行议论(融合定名为ICA-PDA@PLCL/ CC)。进一步的活/死细胞染色为止(图 3B) 显现，CC和PLCL/CC支架上存在一些死细胞(红色)，而PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC (即ic1-PDA@PLCL/CC)上基本王人是活细胞(绿色)，这阐明ICA-PDA@PLCL/CC支架对软骨无细胞毒性。
通过SEM不雅察软骨细胞在支架上的黏赞叹刻画为止(图 3C) 看出，软骨细胞在CC上呈球形，而在PLCL/CC、PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC支架上的细胞则展示更好的黏赞叹铺展。但比拟于PLCL/CC和PDA@ PLCL/CC组，ICA-PDA@PLCL/CC支架上软骨细胞成心于保管原有格局，这阐明ICA-PDA@ PLCL/CC能更好地模拟软骨细胞的糊口环境、促进软骨细胞黏附、保管软骨细胞格局。
Sox-9是激活gag和col Ⅱ的早期软骨生成的特异性因子，在软骨酿成中起着关键作用[29-30]，Col Ⅰ由魁梧软骨细胞产生，不利于软骨酿成[31]，col Ⅱ/col Ⅰ的比值时常用来评估软骨细胞的分化景色，其比值小于1被以为是软骨细胞处于去分化景色[32-33]。从基因检测为止(图 3D)不错看出，比拟CC组，含有短纤维引入的PLCL/ CC、PDA@PLCL/CC和ICA-PDA@PLCL/CC组中的基因sox-9、gag、col Ⅱ抒发昭着加多，而ICA-PDA@PLCL/CC组sox-9、gag、col Ⅱ基因的抒发要高于PLCL/CC和PDA@PLCL/CC组。比拟于PLCL/CC和PDA@PLCL/CC组，ICA-PDA@PLCL/CC组基因col Ⅰ的抒发缩短。从col Ⅱ/col Ⅰ比值不错看出，4组支架col Ⅱ/col Ⅰ的比值均大于1，阐明软骨细胞处于平淡分化景色；而ICA-PDA@PLCL/CC组col Ⅱ/col Ⅰ的比值为4.37，昭着高于其他组，阐明具有较高的促软骨酿成才调。因此，不错得出ICA-PDA@PLCL/CC大概普及sox-9、gag和col Ⅱ基因的抒发，缩短col Ⅰ基因的抒发，col Ⅱ/col Ⅰ高比值阐明ICA-PDA@PLCL/CC更成心于保管软骨细胞表型和促进软骨生成。
进一步通过细胞外基质因素(GAG和Col Ⅱ) 的分泌情况评价ICA-PDA@PLCL/CC的促软骨酿成作用。从ELISA为止(图 3E–F) 不错看出，与CC组比拟，ICA-PDA@PLCL/CC组软骨细胞分泌的GAG和Col Ⅱ的量更高。这阐明ICA-PDA@PLCL/CC仿生支架具有促进软骨细胞软骨相关基因的抒发和相关卵白的生成，利于保管软骨细胞表型。软骨细胞分泌的软骨特异性基质因素是软骨细胞保管其表型的清苦条目，对软骨细胞刻画的保管具有正反馈作用[34-35]，这可能是ICA-PDA@PLCL/CC支架保管软骨细胞球体式态的清苦原因。
2.3 ICA对炎症软骨细胞功能的影响平淡软骨细胞呈圆形或卵形，其所处基质微环境的改变会导致软骨细胞呈成纤维细胞表型[36]。IL-1β是一种促炎症细胞因子，在骨重要炎(osteoarthritis， OA) 中默契清苦作用[37]，可指点基质金属卵白酶(matrix metalloproterinase， MMP) 的生成。因此，IL-1β可被用于模拟OA的炎症微环境，用于软骨细胞体外炎症响应行为议论。从DAPI-phalloidin染色图(图 4A) 中不错看出，无IL-1β刺激组(PDA组)软骨细胞接近球型，加入IL-1β后(PDA/IL-1β组)，软骨细胞呈成纤维细胞格局，但当用含有ICA的支架浸提液条目培养基(ICA/IL-1β组)不断后软骨细胞纤维化细胞表型消弱，呈椭圆格局。从细胞伸长率为止(图 4B) 不错进一步定量印证，含IL-1β组细胞的伸长率均加多，而ICA/IL-1β组细胞伸长率比PDA/IL-1β组缩短了25%。这些为止标明，ICA-PDA@PLCL/CC支架开释的ICA大概缓解软骨细胞在炎症环境中发生的软骨细胞纤维化病变。
从炎症相关基因检测为止(图 4C) 不错看出，比拟于PDA组，PDA/IL-1β组促炎症基因(il-1β、il-6、inos) 的抒发昭着加多，而ICA/IL-1β组促炎症基因il-1β、il-6和inos比PDA/IL-1β组诀别缩短了13.4%、15.4%和30.0%，具有权贵性各别。这些为止标明，ICA-PDA@PLCL/CC支架上的ICA在炎症环境下大概下调促炎症基因的抒发，成心于缓解炎症反应。
从软骨基质代谢基因检测为止(图 4D) 不错看出，比拟于PDA组，PDA/IL-1β组软骨相关功能基因sox-9、gag和col Ⅱ的抒发昭着缩短。与PDA/IL-1β组比拟，ICA/IL-1β组基因sox-9、gag和col Ⅱ的抒发诀别加多了1.3倍、2.0倍和4.8倍，具有极权贵性各别。从mmp3的抒发不错看出，比拟于PDA组，PDA/IL-1β组mmp3的抒发昭着加多，而ICA/IL-1β组由于ICA的存在，mmp3的抒发比PDA/IL-1β组缩短了5.2%，具有权贵性各别。这些为止标明，ICA-PDA@PLCL/CC支架上的ICA大概普及软骨细胞基质合成基因的抒发，减缓基质的降解，从而加快软骨基质的酿成。
甲苯胺蓝是一种碱性染料，细胞产生的酸性物资能与之推敲而被染色，因此不错响应软骨细胞中酸性GAG的合成情况。从图 4E为止不错看出，软骨细胞基质经染色后呈蓝紫色，与培养4 d比拟，培养7 d后的各履行组中的GAG合成昭着加多。比拟于PDA组，PDA/IL-1β组的颜料较浅，而ICA/IL-1β组颜料变深。这些为止标明，在炎症因子的刺激下，GAG的合成受到扼制，而ICA的存在大概减缓炎症的扼制作用，普及软骨细胞外基质的合成。
免疫荧光染色专揽带有荧光标记的二抗与待测卵白的一抗推敲，通过荧光强度来定量相关卵白的合成情况。从图 4F不错看出，与PDA组比拟，PDA/IL-1β和ICA/IL-1β组中Col Ⅱ的抒发昭着消弱，但比拟于PDA/IL-1β组，ICA/IL-1β组由于ICA的作用使Col Ⅱ的抒发加多。从荧光定量分析(图 4G) 不错得出，ICA/ IL-1β组的荧光强度比PDA/IL-1β组普及了1.8倍。这些为止标明，ICA-PDA@PLCL/CC支架开释的ICA大概灵验促进炎症作用下Col Ⅱ的合成，减缓对细胞外基质的降解。
3 论断本议论想象了一种具有促软骨酿成和炎症缓解双重作用的壳聚糖基工程软骨仿生支架(即ICA-PDA@PLCL/CC)。PDA@PLCL短纤维的加入不仅普及了壳聚糖基支架的力学性能，况兼大概促进软骨细胞增殖和粘附；而负载的ICA成心于增强壳聚糖基CTE支架的促软骨酿成才调。在模拟炎症存在的情况下，ICA-PDA@PLCL/CC仿生支架开释的ICA还能减缓软骨细胞的炎症反应，消弱对基质的降解。本议论因此默契了ICA-PDA@PLCL/CC仿生支架在促进软骨酿成的同期还能缓解炎症反应足交 twitter，这为异日开展应用于软骨挫伤的再生配置提供了初步的履行表面基础。